構(gòu)樹(shù)生根培養(yǎng)基的篩選對(duì)比

  以1/2 MS+0.8%瓊脂+3%蔗糖為基礎(chǔ)培養(yǎng)基，加入不同質(zhì)量濃度的6-BA和NAA。采用6-BA采用0.5,1.0,1,5mg/L等3個(gè)水平。NAA采用0.2,0.3,0.4,0,5 mg/L等4個(gè)水平。每瓶接種1~2個(gè)幼苗，每個(gè)水平接種15瓶，培養(yǎng)15 天后觀察并記錄構(gòu)樹(shù)健壯幼苗的生根情況。

  構(gòu)樹(shù)的馴化移栽

  將長(zhǎng)有構(gòu)樹(shù)幼苗的培養(yǎng)瓶轉(zhuǎn)移至半遮陰的自然光下，2~3天后開(kāi)口煉苗。將營(yíng)養(yǎng)缽中裝入蛭石和珍珠巖，洗干凈幼苗根部黏附的培養(yǎng)基后，將幼苗移入營(yíng)養(yǎng)缽中并澆足水。用塑料薄膜為幼苗搭建小拱棚并噴霧保濕，同時(shí)注意通風(fēng)，隨后逐漸降低濕度，15 天后揭去棚膜，讓幼苗在自然條件下生長(zhǎng)。

  結(jié)果與分析

  消毒劑及消毒方法的比較

  滅菌效果很好的處理是75%乙醇溶液浸泡30 秒后，再用0.5%HgCl2滅菌15 分鐘 ，除菌率可以達(dá)到68.2%，外植體的成活率可達(dá)43.6%。

  愈傷組織及芽苗的培養(yǎng)基對(duì)比

  構(gòu)樹(shù)葉片在愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基中培養(yǎng)20天后，觀察不同濃度激素比例下葉片的增殖倍數(shù)與芽苗高度等生長(zhǎng)狀況。由實(shí)驗(yàn)結(jié)果可知，對(duì)愈傷組織的影響較大的激素為6-BA，當(dāng)20天質(zhì)量濃度逐漸增大時(shí)，芽的增殖倍數(shù)逐漸變大;當(dāng)6-BA質(zhì)量濃度為1.5 mg/L，NAA質(zhì)量濃度為1.0mg/L時(shí)，增殖倍數(shù)為5.4，愈傷組織分化效果最明顯。

  因此，誘導(dǎo)愈傷組織分化的很佳培養(yǎng)基配方為MS+1.5 mg/L 6-BA+1.0 mg/L NAA+0.8%瓊瓊脂+3%蔗糖。

  構(gòu)樹(shù)壯苗培養(yǎng)基的篩選

  從試驗(yàn)得知對(duì)壯苗影響較大的激素為6-BA，當(dāng)6-BA質(zhì)量濃度為1.5mg/L，NAA質(zhì)量濃度為0.2 mg/L時(shí)，壯苗效果最明顯，此時(shí)株高為3.6 cm。

  由此可得壯苗效果很佳的培養(yǎng)基配方為MS+1.5 mg/L 6-BA+0.2 mg/L NAA+0.8%瓊脂+3%蔗糖。

  生根培養(yǎng)基的篩選

  接種至生根培養(yǎng)基12 天后可以看到根原基分化出的愈傷組織，15天后可看到誘導(dǎo)出的細(xì)小不定根。從試驗(yàn)看出，當(dāng)6-BA質(zhì)量濃度為0.5mg/L，NAA質(zhì)量濃度為1.0 mg/L時(shí)，根的生長(zhǎng)情況很好，此時(shí)根原基的發(fā)生率為93%。

  由此得出很佳的生根培養(yǎng)基為1/2 MS+0.5 mg/L 6-BA+1.0 mg/L NAA+0.8%瓊脂+3%蔗糖。

  構(gòu)樹(shù)幼苗的馴化移栽

  從試驗(yàn)對(duì)比得知，構(gòu)樹(shù)幼苗在移栽到蛭石中的成活率高于珍珠巖。在珍珠巖中，葉片失水嚴(yán)重，苗木萎蔫，生長(zhǎng)不良;而蛭石中的幼苗則生長(zhǎng)良好，移栽25 天后，長(zhǎng)高3~5cm，葉片明顯變大且長(zhǎng)出1~2條新根，原來(lái)的根伸,1~2 cm。

  試驗(yàn)結(jié)論

  無(wú)菌材料是植物組培快繁的前提，對(duì)葉片進(jìn)行消毒時(shí)，時(shí)間過(guò)長(zhǎng)可能會(huì)對(duì)材料造成毒害，影響葉片的生命活力;時(shí)間過(guò)短可能會(huì)造成消毒不徹底。

  由試驗(yàn)得出：很佳滅菌方法為0.5% HgCl2的處理15分鐘，在考慮選擇何種滅菌劑的同時(shí)，還綜合考慮了滅菌時(shí)間對(duì)滅菌效果的影響。但也有研究認(rèn)為，構(gòu)樹(shù)葉片外植體很佳消毒方法是0.1% 的HgCl2(加吐溫80和0.5%次氯酸鈉的二次滅菌法，這可能是由于試驗(yàn)材料的來(lái)源不同及其生長(zhǎng)環(huán)境的差異，導(dǎo)致材料所帶的微生物不同，從而需要滅菌的強(qiáng)度也有所差異。

  在組織培養(yǎng)中，生長(zhǎng)素類(lèi)物質(zhì)的主要作用是促進(jìn)新梢生長(zhǎng)，誘導(dǎo)外植體產(chǎn)生愈傷組織及促進(jìn)培養(yǎng)組織的延伸生長(zhǎng);細(xì)胞分裂素類(lèi)物質(zhì)的主要作用是促進(jìn)細(xì)胞的分裂和分化，誘導(dǎo)胚狀體和不定芽的形成。在離體條件下，器官的誘導(dǎo)并不是由某種生長(zhǎng)激素的濃度所決定，而是由那些參與分化的物質(zhì)間的比例關(guān)系所決定，當(dāng)6-BA與NAA的比例低時(shí)有利于愈傷組織的形成和芽的生長(zhǎng);比例高時(shí)有利于芽的分化。

  試驗(yàn)研究結(jié)果表明，誘導(dǎo)愈傷組織分化時(shí)6-BA與NAA的適宜比例為3:2;壯苗時(shí)6-BA與NAA的適宜比例15:2;生根時(shí)6-BA與NAA的適宜比例為1:2。